目的：探讨MALDI-TOF-MS技术对乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因突变检测的价值。 方法：依据HBV、HCV基因组多态性及基因突变现有研究结果，选择靶区域，筛选突变位点，MassARRAY Assay Design软件设计iPLEX引物，按iPLEX反应的操作说明进行PCR扩增、SAP反应、引物延伸、脱盐、点样，MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应物的数据，判读基因变异位点。收集本院抗病毒药物单药或多药耐药患者血清30份，将MALDI-TOF-MS技术判读基因变异位点进行DNA测序，将结果与MALDI-TOF-MS检测结果进行对比。 结果：利用MALDI-TOF-MS技术一次性可检测30份血清样本的HBV基因突变，在30份样本中，5份检测结果不一致，其中2份是MALDI-TOF-MS技术未检测到的基因突变点，1份是2个检测位点不一致。 结论：MALDI-TOF-MS技术具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点，为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段。