目的：探讨Rouviere沟引导定位联合“安全窗”技术在困难腹腔镜胆囊切除术中的应用价值。 方法：对2015年1月—2017年10月40例困难腹腔镜胆囊切除患者术中采用依靠Rouviere沟引导定位联合“安全窗”解剖技术手术。 结果：全组患者探测时均可见Rouviere沟结构，并进而依靠Rouviere沟引导定位联合“安全窗”解剖技术进行操作，手术均得以完成，手术未造成严重胆道损伤、大出血等严重手术并发症，仅1例中转开腹。全组平均手术时间（81.8±13.1）min、术中出血量（14.5±9.5）mL，术后禁食时间（26.4±6.2）h、术后排气时间（1.28±0.16）d、下床活动时间（15.1±3.5）d、住院时间（7.5±3.5）d。 结论：对于困难腹腔镜胆囊切除者，运用以Rouviere沟引导定位联合“安全窗”技术协助进行手术，可以帮助辨识胆囊三角区的解剖结构，缩短手术时间，降低胆道损伤等相关并发症。