摘要:背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一，研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达，进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程；膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调，促进恶性表型的发生，并可能受上游miR-342-3p的调控。因此，本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物），用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达；MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖；进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡；Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）；双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型，验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较，Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较，LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05），miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）；与LINC00313 siRNA组比较，共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中，LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达，miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示，与无处理的Li-7细胞移植瘤比较，LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低，肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低，而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调，LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达，进而促进HCC细胞的恶性表型。

摘要:背景与目的：肝细胞癌（HCC）是常见的原发性肝癌，其预后较差。自噬的失调可以促进HCC的发生与进展，本研究旨在分析自噬相关长链非编码RNA（lncRNA）在HCC患者中的潜在预后作用，并构建自噬相关lncRNA风险预测模型。方法：利用生物信息学方法分析TCGA数据库中374例HCC及50例正常对照样本的转录组数据及临床资料，从HADb网站获取自噬基因列表。采用Person相关性分析筛选与自噬基因相关的lncRNA，采用R软件caret程序包将筛选后的342例HCC样本按70%与30%的比例随机分为训练集及验证集，在训练集中采用Kaplan-Meier法及单因素Cox回归分析筛选出具有预后意义的lncRNA，随后采用多因素Cox回归分析筛选具有独立预后意义的自噬相关lncRNA，建立构建预后模型。使用多因素Cox回归系数计算风险评分，将患者分为低风险组和高风险组，分析算风险评分与HCC患者临床特征及总体生存的关系，并使用验证集加以验证。结果：347个lncRNA鉴定为自噬相关lncRNA（|R2|>0.3，P<0.001），其中26个lncRNA对HCC患者具有预后价值（均P<0.05）。多因素Cox回归分析得到基于12个自噬相关lncRNA（CYTOR、DANCR、LINC01138、LUCAT1、MAPKAPK5-AS1、NRAV、NRSN2-AS1、LINC01871、LINC00864、LINC02362、TMEM220-AS1和PSMB8-AS1）的预测患者预后的风险模型。高风险组HCC患者总生存期明显低于低风险组HCC患者（P<0.05）。12-自噬相关lncRNA预后模型评分与肿瘤分级、肿瘤分期和T分期有关（均P<0.05），与患者的年龄、性别无明显关系（均P>0.05）。在训练集中该预后模型的1、3、5年生存的时间依赖性ROC曲线的曲线下面积（AUC）分别为0.801，0.819和0.787，在验证集中其1、3、5年生存的时间依赖性ROC曲线的AUC分别为0.694、0.733和0.746。结论：所筛选的自噬相关lncRNA在HCC的肿瘤生物学中可能起关键作用，12-自噬相关lncRNA的模型对HCC具有预后判断价值。