摘要:背景与目的 近年来，microRNA（miRNA）在肿瘤发生发展中的作用不断被发掘，有望成为新的生物标志物和治疗反应预测因子。本研究探讨miR-510在胰腺导管腺癌（PDAC）中的表达及功能，以期为胰腺癌的早期发现和精准治疗提供新的思路。方法 采用qRT-PCR方法检测10对PDAC患者的癌组织和配对癌旁正常组织，以及人正常胰腺导管上皮细胞系（hTERT-HPNE）和4种PDAC细胞系（PANC-1、MIA PaCa-2、BxPC-3和ASPC-1）中miR-510的表达。用PDAC细胞系构建miR-510过表达及敲低模型，通过CCK8实验、克隆形成实验、划痕试验以及Transwell实验观察PDAC细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果 miR-510在PDAC患者癌组织中的表达水平明显高于配对的癌旁组织，在PDAC细胞系中的表达水平明显高于人正常胰腺导管上皮细胞系（均P<0.05）；功能实验结果显示，miR-510过表达的PDAC细胞的增殖能力、迁移与侵袭能力明显增强，而敲低miR-510的PDAC细胞上述功能则呈反向变化（均P<0.05）。结论 miR-510在PDAC中呈高表达，并促进PDAC细胞的增殖、迁移、侵袭能力。

摘要:背景与目的 长链非编码RNA（lncRNA）核富集转录体1（NEAT1）是一种致癌lncRNA，可通过竞争性内源性RNA（ceRNA）机制促进多种癌症进展。笔者前期通过TargetScan网站发现，NEAT1与微小RNA-124-3p（miR-124-3p），以及miR-124-3p与钙黏蛋白相关蛋白（CTNNB1）之间存在结合位点。因此，本研究探讨NEAT1、miR-124-3p、CTNNB1在胰腺癌中的表达，以及它们之间相互作用对胰腺癌细胞功能的影响。方法 双荧光素酶报告基因试验验证NEAT1、miR-124-3p、CTNNB1的关系。检测胰腺癌组织及癌旁组织、胰腺癌PANC-1细胞及正常胰腺上皮H6C7细胞中NEAT1和miR-124-3p的表达水平，以及CTNNB1蛋白的表达情况。将NEAT1 siRNA转染或与miR-124-3p抑制物同时转染PANC-1细胞，评估转染后PANC-1细胞生物学功能、上皮-间充质转化相关蛋白表达以及在小鼠体内生长能力的变化。结果 双荧光素酶报告基因试验证实NEAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与CTNNB1之间存在靶向关系。胰腺癌组织（vs.癌旁组织）以及PANC-1细胞（vs. H6C7细胞）中，NEAT1与CTNNB1表达升高，miR-124-3p表达降低（均P<0.05）。转染NEAT1 siRNA后，PANC-1细胞NEAT1、CTNNB1表达降低，miR-124-3p表达增高，而同时转染miR-124-3p抑制物后，PANC-1细胞中miR-124-3p与CTNNB1上述表达变化被抑制（均P<0.05）。转染NEAT1 siRNA后，PANC-1细胞的增殖、迁移与侵袭能力明显减弱，凋亡率明显升高，E-cadherin蛋白表达上调，而N-cadherin、vimentin蛋白表达下调，在小鼠体内的生长能力明显降低（均P<0.05）；同时转染miR-124-3p抑制物PANC-1细胞上述指标的变化明显减弱（均P<0.05）。结论 NEAT1可能通过ceRNA机制与miR-124-3p竞争性结合，削弱miR-124-3p对CTNNB1的抑制作用，从而上调CTNNB1表达，促进胰腺癌细胞的恶性生物学行为。

摘要:背景与目的 长链非编码SOX2-OT（SRY-盒转录因子2重叠转录本）可参与调控癌细胞周期、细胞增殖等过程。此外，生物信息学分析发现miR-409-3p与SOX2-OT和膜联蛋白A2（ANXA2）存在结合位点。因此，本研究探讨SOX2-OT/miR-409-3p/ANXA2轴在胃癌细胞中的表达及作用。方法 用qRT-PCR检测胃癌组织与胃癌细胞中SOX2-OT、miR-409-3p和ANXA2 mRNA的表达。将胃癌细胞分别转染SOX2-OT shRNA质粒（sh-SOX2-OT）、共转染sh-SOX2-OT和miR-409-3p抑制物、共转染sh-SOX2-OT和ANXA2过表达质粒，并设空白对照、shRNA阴性质粒对照、抑制物阴性质粒对照和过表达质粒阴性对照，随后检测各组细胞SOX2-OT、miR-409-3p和ANXA2 mRNA表达，细胞增殖与细胞迁移/侵袭能力，细胞凋亡情况，以及增殖标志物Ki-67、活化的半胱天冬酶-3（cleaved caspase-3）、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、ANXA2蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-409-3p、SOX2-OT、ANXA2之间的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测SOX2-OT对胃癌肿瘤生长的影响。结果 胃癌组织（vs.癌旁组织）与胃癌细胞（vs.正常胃上皮细胞）中SOX2-OT和ANXA2表达明显升高，miR-409-3p表达明显降低（均P<0.05）。转染sh-SOX2-OT后，胃癌细胞中SOX2-OT和ANXA2 mRNA表达明显降低，miR-409-3p表达明显升高（均P<0.05）；增殖与迁移/侵袭能力明显减弱，凋亡率明显升高（均P<0.05）；ANXA2、Ki-67、MMP-9蛋白表达明显降低，cleaved caspase-3和Bax蛋白表达明显升高（均P<0.05）。同时转染miR-409-3p抑制物或过表达ANXA2后，sh-SOX2-OT对胃癌细胞的上述影响均被明显抑制（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示，miR-409-3p、SOX2-OT、ANXA2之间的靶向关系。移植瘤实验结果显示，转染si-SOX2-OT的胃癌细胞在裸鼠体内的生长被明显抑制，且移植瘤组织中SOX2-OT表达下调、miR-409-3p表达上调，ANXA2和Ki-67蛋白阳性率明显降低（均P<0.05）。结论 SOX2-OT在胃癌细胞中表达上调，SOX2-OT可能通过竞争性结合miR-409-3p解除其对ANXA2的抑制作用，进而促进胃癌细胞的恶性生物学行为。因此，SOX2-OT/miR-409-3p/ANXA2轴可能是胃癌治疗的潜在分子靶点。

摘要:背景与目的 F-BOX蛋白（FBP）家族成员F-box only protein 43（FBXO43）在肝癌和结直肠癌等消化系统肿瘤中高表达，促进肿瘤恶性进展，且研究显示，FBXO43促进p53降解，发挥促瘤功能。为此本研究进一步探讨FBXO43在胃癌中的表达及其在胃癌恶性进展中的功能与相关机制。方法 基于TCGA、GTEx和Kaplan-Meier Plotter等在线数据库，分析FBXO43在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者预后的相关性。用Western blot和qPCR检测FBXO43在胃癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平；用免疫组化检测在胃癌组织与癌旁组织中FBXO43的蛋白水平。利用脂质体转染特异性靶向FBXO43和p53的小分子干扰RNA分子（siFBXO43和sip53），分别或同时敲低HGC27和MGC803细胞中的FBXO43和p53的表达，利用CCK8、平板克隆形成、Transwell侵袭和迁移等实验，检测细胞生长、增殖、迁移和侵袭能力的影响；利用免疫共沉淀（Co-IP）检测FBXO43和p53的相互作用情况，以及敲低FBXO43后，p53的总泛素化水平。结果 TCGA和GTEx数据显示，FBXO43在胃癌中表达水平明显上调（均P<0.05）；Kaplan-Meier Plotter数据显示，FBXO43高表达的胃癌患者总生存期（HR=1.39，95% CI=1.09~1.78，P=0.007 6）、无进展生存期（HR=1.35，95% CI=1.04~1.76，P=0.023）、进展后生存期（HR=1.6，95% CI=1.18~2.17，P=0.002 1）均显著缩短。Western blot、qPCR和免疫组化结果显示，FBXO43在胃癌细胞和组织中上调，FBXO43蛋白水平与胃癌患者肿瘤大小、远处转移、TNM分期明显有关（均P<0.05）。CCK8、平板克隆形成、Transwell侵袭和迁移结果显示，敲低FBXO43表达，胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱（均P<0.05）。敲低FBXO43表达，上调p53蛋白的水平。Co-IP结果显示，FBXO43与p53可以相互共沉淀，敲低FBXO43，p53的总泛素化水平显著增加。功能实验结果显示，同时敲低p53，FBXO43敲低对胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用被拮抗，回复胃癌细胞的体外恶性表型（均P<0.05）。结论 FBXO43在胃癌中高表达，与胃癌患者预后不良密切相关；FBXO43的作用机制可能是与p53相互作用，促进p53泛素化和降解，进而发挥促进胃癌细胞恶性进展，FBXO43有望成为胃癌治疗的靶点。

摘要:背景与目的 长链非编码RNA（lncRNA）可通过结合mircoRNA（miRNA）来间接调控下游mRNA的转录及降解，从而调控肿瘤发生与发展。lncRNA FOXP4-AS1是近年来发现的一种新的肿瘤相关生物标志物，在不同的肿瘤中发挥着不同的调控作用，笔者前期研究发现，FOXP4-AS1在甲状腺乳头状癌（PTC）中呈低表达，发挥抑癌作用。此外，笔者通过数据库预测miR-507可与FOXP4-AS1互补结合。因此，本研究探讨FOXP4-AS1通过调控miR-507及其下游靶mRNA抑制PTC细胞的生长的作用与机制。方法 通过TCGA数据库分析miR-507在甲状腺癌（TC）中的表达水平及其在TC中的临床意义。qRT-PCR检测PTC细胞系（TPC-1、K1）和正常甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1）中miR-507的表达水平，以及过表达及敲低FOXP4-AS1后检测miR-507表达水平的变化。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXP4-AS1与miR-507靶向关系。分别在FOXP4-AS1过表达及敲低稳转株上转染miR-507的模拟物、抑制物，并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验、划痕愈合实验以及流式细胞术检测细胞功能的变化。用生物信息学方法分析miR-507下游靶点并用qRT-PCR验证。结果 TCGA数据库分析结果显示，miR-507在TC中高表达，且其表达水平TC患者与临床病理分期、T分期、腺外浸润等临床病理特征有关（均P<0.05）。qRT-PCR结果显示，与Nthy-ori3-1细胞比较，miR-507在两种PTC细胞中呈高表达，且过表达和敲低FOXP4-AS1后，两种PTC细胞中miR-507的表达水平随之反向改变（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，FOXP4-AS1与miR-507靶向结合，并抑制miR-507的表达。细胞功能实验及功能回复实验显示，FOXP4-AS1过表达后，PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显减弱，同时加入miR-507的模拟物后，PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）；敲低FOXP4-AS1后，PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显升高，同时加入miR-507的抑制物后，PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）。数据库预测与GO、KEGG富集分析结果显示，miR-507下游可能涉及CAMK4，qRT-PCR验证结果显示，CAMK4的表达水平随FOXP4-AS1表达水平的上调、下调呈同向改变，且其表达水平随miR-507模拟物和抑制物的加入而反向改变（均P<0.05）。结论 FOXP4-AS1可以靶向结合miR-507，并可能通过海绵作用抑制miR-507表达水平调控PTC细胞的增殖、迁移及细胞凋亡。CAMK4可能是FOXP4-AS1/miR-507通路发挥抑癌作用的下游靶点之一。

摘要:背景与目的 核转运蛋白α2（KPNA2）异常表达能增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力，导致肺转移风险，并与乳腺癌患者不良预后相关。本研究进一步分析KPNA2在乳腺癌细胞中的表达情况，并探讨其对乳腺癌细胞生物学行为影响的相关机制。方法 用免疫组化检测62例乳腺癌患者癌组织与癌旁组织标本中KPNA2的表达。将两种人乳腺癌细胞株（MDA-MB-453、MCF-7）分为阴性对照组（转染空白质粒）、KPNA2敲低组（转染KPNA2 siRNA）、ERK抑制剂组（ERK抑制剂U0126处理）、联合组（转染KPNA2 siRNA联合U0126处理）。各组细胞处理48 h后，分别用qRT-PCR与Western blot检测KPNA2 mRNA与蛋白表达，并分别用MTT法、流式细胞术、Transwell实验、Western blot检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力，以及ERK1/2通路与凋亡相关蛋白表达的变化。结果 免疫组化结果显示，KPNA2蛋白在乳腺癌组织中表达水平高于癌旁组织（2.48±0.39 vs. 1.28±0.22，P<0.05）。qRT-PCR与Western blot结果显示，两种乳腺癌细胞株的阴性对照组和ERK抑制剂组的KPNA2 mRNA及蛋白表达水平均无明显差异（均P>0.05），而KPNA2敲低组和联合组KPNA2 mRNA和蛋白表达下调（均P<0.05）。功能实验结果显示，与各自的阴性对照组比较，ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组的细胞增殖率降低、凋亡率升高、细胞侵袭能力减弱，其中联合组各项变化最为明显（均P<0.05）。Western blot结果显示，与各自的阴性对照组比较，ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组磷酸化ERK1/2、裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达均下调，且联合组两者的下调程度最为明显（均P<0.05）。结论 乳腺癌组织中KPNA2表达水平升高，其增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的作用可能与活化ERK信号通路有关，KPNA2有望作为乳腺癌药物开发的新靶点。

摘要:背景与目的 研究显示，microRNA-9（miR-9）在多种恶性肿瘤中表达下调，但其在胃癌中的表达情况及功能尚有待明确。笔者前期通过生物信息学方法预测Bcl-2相关永生基因4（BAG4）可能是miR-9的靶基因，并且发现BAG4在胃癌组织中呈高表达。因此，本研究探讨miR-9在胃癌中的表达与功能，及其与BAG4的关系。方法 采用qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁组织，以及胃癌细胞系与正常胃黏膜细胞中miR-9的表达水平。分别用miR-9模拟物和miR-9抑制物过表达和敲低胃癌细胞的miR-9后，采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖活性，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。荧光素酶报告基因实验分析miR-9和BAG4的靶向关系，并用qRT-PCR法和Western blot检测转染miR-9模拟物和si-BAG4的胃癌细胞中BAG4的表达，以及相关功能实验加以验证。结果 miR-9在胃癌组织（vs.癌旁组织）和胃癌细胞系（vs.正常胃黏膜细胞）中的表达均明显降低（均P<0.05）。miR-9的表达与胃癌患者的肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期明显有关（均P<0.05）。miR-9高表达胃癌患者的总生存率明显高于miR-9低表达胃癌患者（P=0.028）。胃癌细胞过表达miR-9后，增殖和侵袭能力明显减弱，而敲低miR-9后，增殖和侵袭能力明显增强（均P<0.05）。荧光素酶报告基因实验显示BAG4是miR-9下游的靶基因。转染miR-9模拟物或si-BAG4的胃癌细胞中BAG4的mRNA与蛋白表达均明显降低，而转染miR-9抑制物胃癌细胞中BAG4的mRNA与蛋白表达均明显降低（均P<0.05）。转染si-BAG4的胃癌细胞的增殖与侵袭能力明显降低，同时转染miR-9抑制物可逆转si-BAG4对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响（均P<0.05）。结论 miR-9在胃癌中表达降低，且其表达与胃癌的不良生物学特征密切相关，其作用机制可能通过负性调控BAG4的表达，从而影响胃癌细胞的增殖和侵袭。

摘要:背景与目的 胆管癌作为罕见的恶性肿瘤，难以诊断，往往在晚期才被发现，只能选择姑息疗法，但是常规的化疗药物对胆管癌治疗效果较差，急需寻找新的治疗药物。本研究探讨槐耳菌质对人胆管癌细胞恶性生物学行为的影响，及其与TGF-β/Smad通路的关系，旨在为槐耳菌质治疗胆管癌提供理论依据。方法 用不同浓度槐耳菌质孵育人正常肝细胞L-02和人胆管癌细胞HuCCT1不同时间后，检测细胞增殖情况，并计算半数抑制浓度（IC50）；将HuCCT1细胞分为阴性对照组（无干预）、阳性对照组（15 mg/L顺铂）和不同浓度槐耳菌质干预组（根据浓度与时间为预实验结果选择1/5 IC50、2/5 IC50和IC50），用划痕试验与Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力，同时用Western blot检测HuCCT1细胞中TGF-β/Smad通路相关蛋白的表达。结果 只有较高浓度的槐耳菌质（>312.5 mg/L）对L-02细胞的增殖有明显抑制作用；当浓度超过5 mg/L时，槐耳菌质能明显抑制HuCCT1细胞增殖，且呈浓度依赖性（均P<0.05），IC50分别为24 h：138.52 mg/L、48 h：99.41 mg/L、72 h：113.52 mg/L。与阴性对照组比较，阳性对照组与三种浓度（20、40、100 mg/L）的槐耳菌质干预组HuCCT1细胞迁移距离、侵袭细胞数减少，TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4、N-cadherin、Snail和Slug表达降低，E-cadherin表达增加（均P<0.05）；与阳性对照组比较，三个槐耳菌质干预组的上述变化更弱，但呈明显的浓度依赖性（均P<0.05）。结论 槐耳菌质可以抑制HuCCT1细胞恶性生物学行为，其作用机制可能与抑制TGF-β/Smad通路活性有关。

摘要:背景与目的 研究发现，miR-199b-3p在胃癌组织中表达下调，而半胱氨酸丰富跨膜BMP调节因子1（CRIM1）在胃癌组织中表达上调。目前miR-199b-3p在胃癌细胞生物学行为中的作用机制尚未明确，其与CRIM1之间是否有关联也不清楚。因此，本研究探讨是否miR-199b-3p与CRIM1存在相互作用以及对胃癌细胞功能的影响。方法 采用qRT-PCR与免疫组化方法检测胃癌组织与癌旁组织中miR-199b-3p和CRIM1的表达。以胃癌MGC803细胞为研究对象，观察过表达miR-199b-3p（miR-199b-3p模拟物）与敲低CRIM1（si-CRIM1）后，细胞增殖能力、侵袭/迁移能力以及凋亡率的变化；应用生物信息学方法预测和双荧光素酶报告基因实验分析miR-199b-3p和CRIM1的靶向关系，并用Western blot方法验证。结果 qRT-PCR结果显示，与癌旁组织比较，胃癌组织中miR-199b-3p表达水平降低，而CRIM1增加（均P<0.05）；免疫组化实验结果显示，CRIM1在癌组织中呈阳性表达，在癌旁组织呈阴性表达。过表达miR-199b-3p或敲低CRIM1后，MGC803细胞的增殖与侵袭/迁移能力降低，凋亡率增加（均P<0.05）。生物信息学方法预测和双荧光素酶报告基因实验显示miR-199b-3p与CRIM1存在靶向关系；Western blot实验结果表明，转染miR-199b-3p模拟物后，CRIM1表达降低（P<0.05）。结论 CRIM1是miR-199b-3p的靶基因，miR-199b-3p能够通过靶向调控CRIM1的活性进而抑制胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移，并促进胃癌细胞凋亡，miR-199b-3p/CRIM1通路可作为胃癌治疗的潜在靶点进一步研究。

摘要:背景与目的 幽门螺旋杆菌（HP）在人类胃部的定植是引起胃癌发生较明确的危险因素，且研究发现，HP感染后胃癌细胞的氧化应激水平有明显改变，但机制尚未明确。因此，本研究探讨HP引起胃癌细胞氧化应激的潜在机制和作用。方法 用HP感染胃癌细胞SNU-1后，分别用DCF-DA荧光法和CCK-8法检测的活性氧（ROS）水平和增殖能力的变化；用高通量测序和siRNA筛选鉴定HP感染后引起SNU-1细胞氧化应激增强的关键基因，随后通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统鉴定引起胃癌细胞SNU-1氧化应激的关键上游miRNA，同时结合功能获得与功能缺失实验验证。结果 SNU-1细胞感染HP后，ROS水平升高，增殖能力增强，但同时使用氧化应激抑制剂乙酰半胱氨酸处理，SNU-1细胞的以上变化被取消（均P>0.05）。siRNA筛选结果发现，敲低过氧化氢酶2（PRDX2）时HP感染的SNU-1细胞ROS水平升高，增殖能力增强，而过表达PRDX2后则相反（均P<0.05），同时Western blot验证显示，HP感染后SNU-1细胞中PRDX2的表达下调。HP感染后，SNU-1细胞中PRDX2的启动子活性没有变化（P>0.05），但PRDX2的mRNA水平下降（P<0.05）。分析结果显示，HP感染的SNU-1细胞中miR-650的表达水平上升（P<0.05），且miR-650靶向PRDX2 mRNA的3端非编码区。验证结果显示，SNU-1细胞过表达miR-650后，PRDX2的表达下调、ROS水平升高、增殖能力增强，敲低miR-650后则呈反向变化（均P<0.05）；HP感染的SNU-1细胞同时敲低miR-650或同时过表达PRDX2，细胞的增殖能力无明显变化（均P>0.05）。结论 HP感染增加胃癌细胞氧化应激水平的机制和作用可能是其上调miR-650的表达，后者靶向PRDX2 mRNA的3端非编码区抑制PRDX2 mRNA与蛋白表达，导致ROS水平升高，从而促进胃癌细胞的增殖。