摘要:背景与目的 腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）对循环系统的调控作用已获得大量研究，并证实AMPK可以通过调控血管平滑肌细胞（VSMC）内游离Ca2+浓度来调节小动脉舒缩。前期研究发现，AMPK可通过增加cofilin活性导致细胞骨架链状肌动蛋白（F-actin）降解为单体肌动蛋白（G-actin）而扩张血管，本研究目的为进一步探讨AMPK活化cofilin的分子机制。方法 取C57BL6/N小鼠肠系膜上动脉的II、III级分支，在压力myograph模型上，检测离体动脉血管对肾上腺素和乙酰胆碱的反应，取收缩率>30%且舒张率>90%的血管用于实验；然后将血管分为两组，在预处理及高钾MOPS溶液预收缩后分别加入AMPK激活剂PT1（PT1组）和溶剂DMSO（对照组），比较两组血管的扩张情况。然后采用Western blot法与免疫荧光Western blot法检测两组动脉组织中磷酸化AMPK（p-AMPK）及AMPK下游相关蛋白的表达。结果 所有实验动脉血管活性均符合要求，且两组血管之间的收缩与舒张能力差异无统计学意义（均P>0.05）。两组动脉血管直径在预处理及预收缩时差异均无统计学意义（均P>0.05）。在相应的处理后，PT1组血管逐渐扩张，而对照组无明显扩张，60 min后，PT1组血管扩张至（196.6±11.5）μm，而对照组直径为（136.1±8.1）μm，差异有统计学意义（P<0.001）。与对照组比较，PT1组血管组织中p-AMPK、G-actin水平升高，分别为对照组的（3.25±0.52）倍、（2.26±0.64）倍，而磷酸化cofilin（p-cofilin）水平降低，为对照组的（0.48±0.19）倍，差异均有统计学意义（均P<0.05）；总热休克蛋白20（t-HSP20）无明显变化（P>0.05），但磷酸化HSP20（p-HSP20）水平升高，为对照组的（2.45±0.52）倍，差异有统计学意义（P<0.001）。结论 本研究结果提示，HSP20参与协助了AMPK对cofilin的活化，机制可能为活化的AMPK通过增加p-HSP20水平，竞争结合p-cofilin位点，促进其去磷酸化，增加cofilin活性，从而降低细胞骨架actin稳态，致血管舒张。

摘要:背景与目的：柚皮素（NAR）是天然的黄酮类化合物，能够抑制宫颈癌、胃癌、舌鳞癌及肝癌细胞的生长，但其对甲状腺癌细胞的作用尚不明确。本实验探讨NAR对甲状腺细胞的影响，并初步研究其作用机制，以期为甲状腺癌的药物研发提供理论基础。方法：不同浓度的NAR处理甲状腺癌ACT-1细胞不同时间后，用MTT法检测细胞存活率，以观察NAR对ACT-1细胞的时间、浓度效应并计算IC50值。在以上实验基础上，选择适合的浓度的NAR与适合的时间处理ACT-1细胞，然后分别采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡；绿色荧光蛋白（GFP）标记质粒转染检测自噬小体变化；Western blot法检测自噬相关蛋白（LC3 I、LC3 II、p62）以及AMPK/mTORC1通路相关蛋白表达的变化，以及AMPK抑制剂对NAR作用的影响。结果：NAR能明显抑制ACT-1细胞的存活，呈时间与浓度依赖性（均P<0.05），其12、24和48 h的IC50值分别为85.65、50.12、38.94 μg/mL。选用25、50、100 μg/mL的NAR处理ACT-1细胞24 h后，细胞凋亡率、自噬小体数量、LC3 II/LC3 I和p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高，p62和p-mTORC1/mTORC1蛋白表达明显降低，均呈浓度依赖性（均P<0.05）。用100 μg/mL NAR同时加入25 μmol/L AMPK抑制剂后处理ACT-1细胞后，NAR的以上作用以及升高凋亡效应蛋白caspase-3的作用被明显抑制（均P<0.05）。结论：NAR能够抑制甲状腺癌ACT-1细胞增殖，诱导凋亡，这可能与其调控AMPK/mTORC1信号通路，增强自噬相关。